支原體無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，體積遠(yuǎn)小于細(xì)菌，普通光學(xué)顯微鏡下無法直接觀察到，且不會導(dǎo)致培養(yǎng)液出現(xiàn)明顯渾濁、沉淀等肉眼可見的變化，常會在細(xì)胞傳代多次后才被發(fā)現(xiàn)，極易被實驗人員忽略。支原體繁殖過程中會大量消耗培養(yǎng)液中的氨基酸、核苷酸、維生素等細(xì)胞必需營養(yǎng)，其代謝產(chǎn)生的酸性物質(zhì)等毒性副產(chǎn)物會改變培養(yǎng)液酸堿度，破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，干擾細(xì)胞正常的核酸、蛋白合成過程，最終導(dǎo)致細(xì)胞增殖速率下降、形態(tài)異常、凋亡率升高，甚至喪失原有生物學(xué)特性。支原體污染會直接干擾細(xì)胞功能相關(guān)實驗的準(zhǔn)確性，導(dǎo)致實驗結(jié)論出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差；若涉及臨床相關(guān)細(xì)胞（如免疫細(xì)胞、干細(xì)胞）的污染，還存在安全隱患，可能導(dǎo)致整個實驗周期作廢，造成科研經(jīng)費與時間的浪費。
支原體污染細(xì)胞的常規(guī)檢測方法：
1.染色觀察法：利用可與支原體核酸結(jié)合的熒光染料或特殊染色劑處理細(xì)胞樣本，通過熒光顯微鏡或普通光學(xué)顯微鏡觀察是否存在微小的熒光信號或染色顆粒，該方法操作簡便、耗時短，適合作為日常初篩手段。
2.培養(yǎng)指示法：將待檢測細(xì)胞與對支原體高度敏感的指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察指示細(xì)胞是否出現(xiàn)有的細(xì)胞病變，或使用專門適配支原體生長的液體培養(yǎng)基，依據(jù)培養(yǎng)液的顏色變化、濁度變化判斷是否存在支原體污染，該方法靈敏度較高，可檢出大部分常見支原體。
3.分子生物學(xué)檢測法：通過設(shè)計針對支原體保守基因序列的引物進(jìn)行核酸擴(kuò)增，或使用特異性探針開展檢測，也可通過基因測序確認(rèn)污染支原體的種類，該方法靈敏度高、特異性強，可同時檢測多種支原體，是目前實驗室常用的精準(zhǔn)檢測手段。
支原體污染細(xì)胞的有效清除路徑：
1.抗生素處理法：向污染細(xì)胞的培養(yǎng)體系中添加針對支原體的專用抗生素，經(jīng)過一段時間的孵育處理殺滅支原體，該方法操作簡單、成本較低，適合輕度污染的細(xì)胞，但需注意部分支原體可能產(chǎn)生耐藥性，且處理不當(dāng)會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。
2.綜合清洗換液法：先將細(xì)胞用基礎(chǔ)培養(yǎng)基多次清洗去除殘留的支原體與污染代謝物，再更換為添加了抗支原體成分的新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，同時將所有接觸過污染細(xì)胞的培養(yǎng)耗材、試劑全部更換或重新滅菌，避免殘留支原體導(dǎo)致二次污染，該方法適合污染程度較輕的細(xì)胞。
3.細(xì)胞株整體替換法：若細(xì)胞污染程度嚴(yán)重，經(jīng)上述方法處理后仍無法清除支原體，應(yīng)及時廢棄污染細(xì)胞，從正規(guī)細(xì)胞庫重新采購?fù)醇?xì)胞，或復(fù)蘇凍存的早期無污染備份細(xì)胞，這是清除方式，可避免后續(xù)實驗持續(xù)受到污染干擾。
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